促紅細胞生成素 (EPO)檢測試劑盒簡介

促紅細胞生成素（英文名：Erythropoietin，簡稱：EPO）是一種調(diào)控血紅細胞制造的糖蛋白質(zhì)激素，骨髓中血紅細胞前驅(qū)的細胞因子。人體的促紅細胞生成素由肝臟和腎合成分泌。嬰幼兒時期主要由肝臟合成，成年后主要由腎臟合成。促紅細胞生成素因為層出不窮的禁藥事件而為公眾所知。注射人工合成的紅細胞生成激素刺激劑（ESA）可以提高運動員的成績。這種藥物與人體自身合成的促紅細胞生成素有微小的差別，比較容易被檢測出。

促紅細胞生成素 (EPO)檢測試劑盒檢測技術(shù)簡介

雙抗體夾心法

　　1.　包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

　　3.　加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

　　4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5.　終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

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